Тест-система "ЭВ-РекИФА-М"

Основой тест-системы иммуноферментной для выявления антител класса М к энтеровирусам (ЭВ) является рекомбинантный энтеровирус-специфический полипептид, содержащий групповые антигенные эпитопы ЭВ.

Основным свойством тест-системы является ее способность выявлять антитела класса М к энтеровирусам в ликворе и сыворотке крови больных за счет их взаимодействия с иммобилизованным на лунках планшета рекомбинантным энтеровирус-специфическим полипептидом. Образованный комплекс антиген-антитело выявляют с помощью иммунопероксидазного коньюгата.

Назначение

Тест-система предназначена для исследования сывороток крови и ликворов больных при серологической диагностике энтеровирусных инфекций. Рассчитана на проведение 96 исследований в 4-ех постановках (96/4)

Состав тест-системы

Способ применения

1.Подготовка исследуемых проб (сывороток или ликворов).

Кровь от обследуемых людей забирают не ранее 3-5 суток от начала заболевания в стеклянную или пластмассовую посуду в объеме не менее 0,5-1,0 мл. Выдерживают в термостате при (37 1)0С 30 мин., затем центрифугируют при 1000-1500 об/мин., на центрифуге типа ОПН-8 в течение 15 мин. Сыворотку отбирают и хранят при минус 20°С до исследования. Ликворы забирают в стеклянную или пластмассовую посуду в объеме 0,2 мл. Ликворы хранят при минус 20°С до исследования. Многократные замораживания-оттаивания сывороток и ликворов нежелательны.

2 Постановка иммуноферментного анализа (ИФА)

Сенсибилизация твердой фазы. АГ ЭВ (№1) растворяют в 4 мл КББ (№6), перемешивают пипетированием и вносят по 0,1 мл в каждую лунку планшета. Заполненные ряды инкубируют в закрытом виде 18-20 ч при (42) 0С в холодильнике.

Отмывка. Проводится после каждой стадии исследования. Концентрат ФСТБ (№7) разводят в 25 раз дистиллированной водой и тщательно перемешивают. В каждую лунку вносят по 0,2 мл полученного отмывочного раствора, выдерживают 1-2 минуты (лучше на шейкере), удаляют содержимое и повторяют эту процедуру 4 раза.

БСА (№8) тщательно растворяют в 2,5 мл ФСБ (№5). БСА-ФСБ вносят по 0,1 мл в каждую лунку планшета. Инкубируют 1,0 ч при комнатной температуре. Отмывают 4 раза.

Приготовление разведений контрольных образцов и исследуемых образцов. ПК (№2) растворяют в 0,5 мл отмывочного раствора, ОК (№3) растворяют в 0,5 мл отмывочного раствора. Исследуемые образцы сывороток разводят в 500 раз на отмывочном растворе. Образцы ликворов исследуют без предварительного разведения.

Приготовленные образцы вносят в планшет в объеме 0,1 мл в каждую лунку: ОК – в 4 лунки; ПК – в 2 лунки; каждую из исследуемых сывороток – в 2 лунки планшета. Инкубируют 1,0 ч при (37  1)0С. Отмывают 4 раза.

Коньюгат антивидовой пероксидазный (№4) растворяют в 3,0 мл отмывочного раствора и вносят по 0,1 мл в каждую лунку планшета. Инкубируют 1,0 ч при (37  1)0С. Отмывают 4 раза.

Внесение ТМБ Вносят в каждую лунку по 0,1 мл раствора №9 и выдерживают в защищенном от света месте в течение 10 мин при комнатной температуре, после чего реакцию останавливают добавлением в лунки по 0,05 мл стоп-реагента (№10).

3.Учет результатов

Проводят фотометрию проб через 1-2 мин после внесения стоп-реагента. Длина волны измерения - 450 нм (фоновая - 620 нм). В лунках с ПК значение показателя оптической плотности (ПОП) должно не менее чем в 2,1 раза превышать среднюю величину ПОП для лунок с ОК. ПОП для ОК не должен превышать 0,2 оптической единицы. ПОП для ПК не должен быть ниже 0,42 оптической единицы. Положительными считаются пробы, у которых ПОП превышает среднее значение ПОП для ОК в 2,1 раза и более.

Требования безопасности

При работе с тест-системой следует применять меры предосторожности в соответствии с требованиями работы с вирусами III группы: проводить работу в халате, марлевых повязках и резиновых перчатках. Стоп - реагент содержит серную кислоту - не допускать попадания на кожу и слизистые.

Срок годности. Условия хранения и транспортировка

Срок годности тест-системы 12 месяцев с даты изготовления.

Хранение тест-системы должно осуществляться при температуре от плюс 2 до плюс 8оС. Реагент №4 хранится при температуре минус 20оС.

Транспортировку осуществляют всеми видами крытого транспорта при температуре плюс 2-80С.